微量核酸提取試劑盒（毛發(fā)/指甲）

Step1、材料準(zhǔn)備和前處理【指甲】1.將指甲(趾甲)剪成1x1 mm左右的小片段(樣本量≤50 mg)，全部轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管（自備）中，加入300 μL裂解液1和20 μL蛋白酶K，浸沒樣本，充分渦旋混勻或搖晃混勻。2.將離心管置于65℃，震蕩（900~1,200 rpm）孵育2 h。3.待2 h消化完畢后，12,000 rpm離心3 min，使管蓋以及管壁上的液體離心至管底，待用。【毛發(fā)】1.取 1~3 根毛發(fā)剪成2 mm左右的小片段，全部轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管（自備）中，加入300 μL裂解液1和20 μL蛋白酶K，浸沒樣本，充分渦旋混勻或搖晃混勻。2.將離心管置于65℃，震蕩（900~1,200 rpm）孵育2 h。3.待2 h消化完畢后，12,000 rpm 離心3 min，使管蓋以及管壁上的液體離心至管底，待用。Step2、核酸提取1.從消化完畢后，離心后的1.5 mL離心管中吸取所有上清液至新的離心管中，加入20 μL磁珠懸浮液和600 μL的結(jié)合液2，顛倒混勻5 min。2.將離心管放置于磁力架上靜置30 sec，磁珠吸附后，小心吸去液體。3.將離心管從磁力架上取下，加入500 μL洗滌液3，振蕩混勻2 min。4.將離心管放置于磁力架上靜置30 sec，磁珠吸附后，小心吸去液體。5.將離心管從磁力架上取下，加入500 μL洗滌液4，振蕩混勻2 min。6.將離心管放置于磁力架上靜置30 sec，磁珠吸附后，小心吸去液體。7.將離心管從磁力架上取下，加入500 μL洗滌液5，振蕩混勻2 min。8.將離心管放置于磁力架上靜置30 s，磁珠吸附后，小心吸去液體。9.重復(fù)步驟7和8一次。10.將離心管于磁力架上，室溫晾干2~3 min。注意：乙醇?xì)埩魰?huì)抑制后續(xù)的酶反應(yīng)，所以晾干時(shí)要確保乙醇揮發(fā)干凈。但也不要干燥太長(zhǎng)時(shí)間，以免難以洗脫DNA。11.將離心管從磁力架上取下，加入50~100 μL洗脫液6，振蕩混勻，置于65℃，震蕩（900~1,200 rpm）孵育15 min。12.將離心管放置于磁力架上靜置2 min，磁珠吸附后，小心將DNA溶液轉(zhuǎn)移至一個(gè)新離心管中，并于適當(dāng)條件保存。